Продукти

Кристалічні структури комплексів карбоксипептидази Т (CpT) із субстратними аналогами фенілаланіну та аргініну – бензилянтарною кислотою та (2-гуанідиноетилмеркапто)янтарною кислотою – визначено методом молекулярної заміни з роздільною здатністю 1,57 Å та 1,62 Å для уточнення широкого профілю субстратної специфічності. ферменту.Показано, що консервативні залишки Leu211 і Leu254 (також присутні як в карбоксипептидазі A, так і в карбоксипептидазі B) є структурними детермінантами для розпізнавання гідрофобних субстратів, тоді як Asp263 був для розпізнавання позитивно заряджених субстратів.Мутації цих детермінант змінюють субстратний профіль: варіант CpT Leu211Gln набуває властивостей, подібних до карбоксипептидази В, а варіант CpT Asp263Asn — селективності, подібної до карбоксипептидази А.Показано, що петля Pro248-Asp258, яка взаємодіє з Leu254 і Tyr255, відповідає за розпізнавання С-кінцевого залишку субстрату.Зв’язування субстрату на субсайті S1’ призводить до залежного від ліганду зсуву цієї петлі, а рух бічного ланцюга Leu254 індукує конформаційну перебудову залишку Glu277, що має вирішальне значення для каталізу.Це новий погляд на субстратну селективність металокарбоксипептидаз, який демонструє важливість взаємодії між субсайтом S1' і каталітичним центром.