Продукти

Ядерне накопичення мутантної форми ядерного білка Lamin-A, що називається прогерином (PG) або ламіном AΔ50, відбувається при синдромі прогерії Хатчінсона-Гілфорда (HGPS) або прогерії, хворобі прискореного старіння.Одним із основних симптомів цього генетичного захворювання є втрата підшкірного жиру внаслідок різкої ліподистрофії. Ми стабільно індукували експресію людського PG та GFP (зеленого флуоресцентного білка) як контроль у клітинах 3T3L1 за допомогою лентивірусної системи для вивчення вплив експресії PG на здатність до диференціювання цієї лінії клітин, одна з найбільш використовуваних адипогенних моделей.Кількісна протеоміка (iTRAQ) була проведена для вивчення ефекту накопичення PG.Кілька модульованих білків перевірено за допомогою імуноблоттингу та ПЛР у реальному часі.Мітохондріальну функцію аналізували шляхом вимірювання а) базальної активності мітохондрій, б) виробництва супероксид-аніону та в) індивідуальної ефективності різних комплексів дихального ланцюга. Ми виявили, що надмірна експресія PG шляхом доставки гена лентивірусу призводить до зниження швидкості проліферації та до дефектів адипогенної здатності порівняно з контролем.Кількісний протеомний аналіз показав, що 181 білок значно (p<0,05) модулювався в PG-експресуючих преадипоцитах.Функція мітохондрій порушується в клітинах, що експресують PG.Зокрема, ми виявили підвищення активності комплексу I та гіперпродукцію супероксид-аніону.Інкубація з агентами-поглиначами активних форм кисню (АФК) призводить до зниження аутофагічного протеолізу, як виявлено співвідношенням LC3-II/LC3-I. Експресія PG у клітинах 3T3L1 сприяє змінам кількох біологічних процесів, включаючи структуру цитоскелету, ліпідний обмін, кальцій регуляція, трансляція, згортання білків і генерація енергії мітохондріями.Наші дані посилюють внесок накопичення ROS у фенотип передчасного старіння та встановлюють зв’язок між мітохондріальною дисфункцією та втратою протеостазу при HGPS.