Продукти

Білок ORF45 герпесвірусу, асоційованого з саркомою Капоші (KSHV), є специфічним для гаммагерпесвірусу білком раннього раннього тегументу.Наші попередні дослідження показали його вирішальну роль як на ранніх, так і на пізніх стадіях інфекції KSHV.У цьому дослідженні ми досліджували інтерактом ORF45 за допомогою панелі моноклональних антитіл.На додаток до раніше ідентифікованих білків позаклітинної регульованої кінази (ERK) і рибосомної кінази p90 S6 (RSK), ми знайшли кілька інших спільно очищених білків, включаючи видатні білки ~38 кДа і ~130 кДа.Мас-спектрометрія показала, що білок 38 кДа є вірусним ORF33, а білок 130 кДа є клітинним USP7 (убіквітин-специфічна протеаза 7).Ми зіставили ORF33-зв’язуючий домен із висококонсервативними карбоксильними кінцевими 19 амінокислотами (aa) ORF45, а USP7-зв’язувальний домен – із зареєстрованим консенсусним мотивом у центральній області ORF45.Використовуючи імунофлуоресцентне фарбування, ми спостерігали спільну локалізацію ORF45 з ORF33 або USP7 як в трансфікованих іонах, так і в клітинах, інфікованих KSHV.Крім того, ми помітили ORF45-залежну релокалізацію частини ORF33/USP7 з ядра в цитоплазму.Ми виявили, що ORF45 викликав збільшення накопичення білка ORF33, яке було скасовано, якщо ORF33- або USP7-зв'язуючий домен в ORF45 був видалений.Крім того, делеція збереженого карбоксильного кінця ORF45 у геномі KSHV різко знизила рівень білка ORF33 в клітинах, інфікованих KSHV, і скасувала продукцію потомства віріонів.У сукупності наші результати не тільки розкривають нові компоненти інтерактому ORF45, але й демонструють, що взаємодії між цими білками є вирішальними для літичної реплікації KSHV. Герпесвірус, асоційований із саркомою Капоші (KSHV), є збудником кількох видів раку людини.KSHV ORF45 є багатофункціональним білком, необхідним для літичної реплікації KSHV, але точні механізми, за допомогою яких ORF45 виконує свої критичні функції, невідомі.Наші попередні дослідження показали, що весь білок ORF45 у клітинах існує у вигляді комплексів з високою молекулярною вагою.Тому ми прагнули охарактеризувати інтерактом ORF45, щоб зрозуміти його ролі під час літичної реплікації.Використовуючи панель моноклональних антитіл, ми досліджували інтерактом ORF45 в клітинах, інфікованих KSHV.Ми ідентифікували двох нових партнерів зв’язування ORF45: вірусний білок ORF33 і клітинну убіквітин-специфічну протеазу 7 (USP7).Крім того, ми демонструємо, що взаємодія між ORF45 і ORF33 має вирішальне значення для ефективного виробництва вірусних частинок KSHV, припускаючи, що цілеспрямоване втручання в цю взаємодію може являти собою нову стратегію інгібування літичної реплікації KSHV.