Продукти

Для конкретного кількісного визначення кількох метаболітів 5-фторурацилу (5-FU) і двох ендогенних монофосфатних нуклеотидів ми розробили оригінальний метод, заснований на рідинній хроматографії та тандемній мас-спектрометрії (LC-MS/MS).Цей аналіз дозволив визначити: (i) внутрішньоклітинне виробництво 5-фтор-2'-дезоксиуридин-5'-монофосфату (5-FdUMP) з 5-FU або 5-фтор-2'-дезоксиуридину (5-FdUrd) , (ii) вплив концентрації 5-FdUMP на внутрішньоклітинне співвідношення 2'-дезоксиуридин-5'-монофосфат (dUMP)/тимідин-5'-монофосфат (TMP), і (iii) ступінь секреції 5-FdUMP і 5-FU з людських культивованих клітин транспортерами ABC.У наших експериментальних умовах клітини інкубували з 5-FU або 5-FUrd.Потім клітинні білки осаджували метанолом.Ця процедура забезпечила високе відновлення екстракції.Крім того, для вимірювання секреції 5-FU і 5-FdUMP з клітин ми провели кількісне визначення цих молекул у культуральному середовищі.Середовище або безпосередньо вводили (5-FU), або проводили твердофазну екстракцію за допомогою екстракційного картриджа Oasis Wax (5-FdUMP).Розділення аналітів проводили на колонці dC18 Atlantis 3,5 мкм (100 мм × 2,1 мм внутрішній діаметр) в ізократичному режимі з використанням буфера форміату амонію/метанолу/води (5/5/90, об./об.) як рухомої фази.Тривалість роботи не перевищувала 6,2 хв.Аналіти були іонізовані в інтерфейсі електророзпилення в режимі негативних іонів.Ми підтвердили метод у діапазоні 2,5–150 нг мл-1 відповідно до сполук.Внутрішньо- та міжтестова варіабельність була нижчою за 10% протягом семи днів.Усі сполуки були стабільними в клітинах або культуральному середовищі, коли зразки зберігалися при -20 °C принаймні два тижні та після трьох циклів заморожування-відтавання.В обох середовищах ефекту матриці не спостерігалося.