Продукти

Патогенні молекулярні шляхи при циротичних захворюваннях печінки, таких як вірус гепатиту С (ВГС), аутоімунний гепатит (АІГ) і первинний біліарний цироз (ПБЦ), охарактеризовані погано.Диференційно експресовані гени часто важливі в патогенезі захворювання.Супресійна субтрактивна гібридизація (SSH) — це загальногеномний підхід, який збагачує диференціально експресовані транскрипти мРНК.Ми мали на меті провести нові спостереження диференціальної експресії генів при цирозі печінки за допомогою SSH у поєднанні з кількісною полімеразною ланцюговою реакцією зворотної транскриптази в реальному часі (RT-PCR).Транскриптоми печінки при цирозі HCV, цирозі AIH, PBC та тканини печінки без захворювання були досліджені за допомогою SSH.Отримані клони комплементарної ДНК (кДНК) повторно перевіряли на диференціальну експресію за допомогою дот-блот гібридизації, а потім секвенували.Експресію вибраного гена кількісно визначали за допомогою RT-PCR у реальному часі.Після SSH 694 клони були повторно перевірені на диференціальну експресію генів, з яких 145 були секвеновані та виявлено, що походять від 89 різних генів.Сім клонів були гомологічними лише з послідовностями експресованої мітки послідовності (EST), що кодують гени, які не мають відомої функції.Покращена експресія чотирьох генів була підтверджена RT-PCR у реальному часі: трансмембранний член суперродини 4 3 (тетраспанін CO-029) у всіх формах цирозу, білок, що взаємодіє з їжаком (HIP) при цирозі AIH та хітиназа 3-подібний-1 (HC gp-39 або ykl-40) і повтор аргінін-глутамінової кислоти (RERE) при цирозі HCV.Поліморфізм гена RERE та варіанти сплайсингу спостерігалися у всіх досліджених тканинах.Підвищення регуляції тетраспаніну CO-029 в основному було локалізовано в клітинах жовчних проток.На завершення, нові спостереження диференціальної експресії генів при цирозі печінки людини були зроблені з використанням SSH як основного інструменту відкриття.Зокрема, необхідні подальші дослідження гена RERE та його продуктів при захворюваннях печінки, асоційованих з ВГС.