Продукти

Еукаріотичні клітини містять тонкий баланс незначних кількостей чотирьох дезоксирибонуклеозидтрифосфатів (dNTP), достатніх лише для кількох хвилин реплікації ДНК.Як дефіцит, так і надлишок одного dNTP може призвести до збільшення частоти мутацій, неправильного відновлення ДНК або виснаження мітохондріальної ДНК.Зазвичай кількісно визначають dNTP за допомогою ферментативного аналізу, в якому включення радіоактивного dATP (або радіоактивного dTTP в аналізі на dATP) у специфічні синтетичні олігонуклеотиди за допомогою ДНК-полімерази пропорційне концентрації невідомого dNTP.Ми виявили, що зазвичай використовувана ДНК-полімераза Кленова може замінити відповідний рибонуклеотид на невідомий dNTP, що в деяких випадках призводить до значного переоцінки dNTP.Тепер ми опишемо умови аналізу для кожного dNTP, які уникають включення рибонуклеотидів.Для аналізів dTTP і dATP достатньо мінімізувати концентрацію ферменту Кленова та міченого dATP (або dTTP);для dCTP і dGTP нам довелося замінити фермент Кленова на ДНК-полімеразу Taq або термосеквеназу.Ми припускаємо, що в деяких попередніх звітах включення рибонуклеотиду могло спричинити занадто високі значення dGTP і dCTP.