Продукти

Фосфорилювання білка регулює різноманітні функції клітин і відіграє ключову роль у ранньому розвитку рослин.Щоб доповнити та розширити попередні дослідження фосфорилювання білка в проростках арабідопсису, ми використали альтернативний підхід, який поєднує екстракцію білка в неденатуруючих умовах із збагаченням афінної хроматографії з іммобілізованими іонами металів (IMAC) інтактними фосфопротеїнами в екстрактах, збіднених Rubisco, з наступною ідентифікацією. за допомогою двовимірного гель-електрофорезу (2-DE) і рідинної хроматографії-тандемної мас-спектрометрії (LC-MS/MS).Розщеплення трипсином у гелі та аналіз вибраних гелевих плям виявили 144 фосфорильованих пептиди та залишки, з яких лише 18 фосфопептидів і 8 фосфозитів були знайдені в базах даних сайтів фосфорилювання PhosPhAt 4.0 та P3DB Arabidopsis thaliana.Більше половини з 82 ідентифікованих фосфопротеїнів брали участь у вуглеводному обміні, фотосинтезі/диханні або механізмах реакції на окислювальний стрес.Збагачення інтактних фосфопротеїнів перед 2-DE та LC-MS/MS, очевидно, покращує виявлення фосфорильованих залишків треоніну та тирозину порівняно з методами, які використовують збагачення на пептидному рівні, що свідчить про те, що два підходи є певною мірою доповнювальними з точки зору охоплення сайтів фосфорилювання.Порівняння результатів для молодих саджанців з результатами, отриманими раніше для зрілих листків арабідопсису, виявило п’ять білків, які диференційовано фосфорилюються в цих тканинах, демонструючи потенціал цього методу для дослідження динаміки фосфорилювання білка під час розвитку рослини.