Продукти

Подібно до інших вірусів із позитивною ланцюгом РНК, томбусвіруси реплікуються за допомогою мембраннозв’язаного комплексу вірусної реплікази (VRC).VRC складається з кодованої вірусом p92 РНК-залежної РНК-полімерази (RdRp), вірусного РНК-шаперону p33 і кількох кооптованих білків-господарів.Щоб стати функціональним RdRp після його трансляції, білок реплікації p92 повинен бути включений у VRC з подальшою його активацією.Раніше ми показали в дослідженні на основі безклітинного дріжджового екстракту, що для активації RdRp вірусу кущистого утворення помідорів (TBSV) потрібен розчинний(і) фактор(и).У цій статті ми ідентифікуємо білок клітинного теплового шоку 70 (Hsp70) як кооптований фактор-господар, необхідний для активації N-кінцевого усіченого рекомбінантного TBSV RdRp.Крім того, блокування функції Hsp70 на основі малих молекул пригнічує синтез РНК томбусвірусом RdRp in vitro.Крім того, ми показуємо, що нейтральні фосфоліпіди, а саме фосфатидилетаноламін (PE) і фосфатидилхолін (PC), посилюють активацію RdRp in vitro.Навпаки, фосфатидилгліцерин (PG) демонструє сильний і домінуючий інгібуючий ефект на активацію RdRp in vitro.Ми також демонструємо, що PE та PC стимулюють взаємодію RdRp-вірусної плюс-ланцюгової РНК [(+)РНК], тоді як PG інгібує зв’язування вірусної РНК з RdRp.Базуючись на стимулюючій і інгібуючій ролях різних фосфоліпідів в активації RdRp томбусвірусу, ми припускаємо, що ліпідний склад цільових субклітинних мембран може використовуватися томбусвірусами для регулювання нової збірки VRC під час перебігу інфекції. Кодована вірусом РНК-залежна РНК-полімераза (RdRp), який відповідає за синтез нащадків вірусної РНК в інфікованих клітинах кількох позитивних РНК-вірусів, спочатку неактивний.Ця стратегія, ймовірно, дозволить уникнути синтезу вірусної РНК у цитозолі, що швидко призведе до індукції клітинних противірусних відповідей, викликаних РНК.Під час складання пов’язаного з мембраною комплексу реплікази вірусний RdRp активується через неповністю вивчений процес, який робить RdRp здатним до синтезу РНК.Використовуючи TBSV RdRp, ми показуємо, що кооптований клітинний шаперон Hsp70 і нейтральні фосфоліпіди полегшують активацію RdRp in vitro.Навпаки, фосфатидилгліцерин (PG) має домінуючий інгібуючий ефект на активацію RdRp in vitro та взаємодію RdRp-вірусної РНК, що свідчить про те, що мембранний мікродомен, що оточує RdRp, сильно впливає на його здатність до синтезу РНК.Таким чином, активація вірусного RdRp, ймовірно, залежить від кількох компонентів господаря в інфікованих клітинах.