Продукти

Окислювальне пошкодження основ ДНК зазвичай призводить до утворення окислених пуринів, зокрема 7,8-дигідро-8-оксогуаніну (8-оксоГ) і 7,8-дигідро-8-оксоаденіну (8-оксоА), причому перший є добре відоме мутагенне ураження.Оскільки 8-oxoG легко піддається подальшому окисленню порівняно зі звичайними основами, введення основи під час синтезу ДНК навпроти окисленої форми 8-oxoG було досліджено in vitro.Синтетичну матрицю, що містить одне пошкодження 8-oxoG, спочатку обробляли різними одноелектронними окислювачами або в умовах синглетного кисню, а потім піддавали подовженню праймера, що каталізується фрагментом Кленова екзо- (Kf екзо-), ДНК-полімеразою альфа тимуса теляти (pol альфа ) або бета-полімераза ДНК людини (pol beta).Відповідно до попередніх звітів, dAMP і dCMP вибірково вставляються навпроти 8-oxoG усіма трьома ДНК-полімеразами.Цікаво, що було виявлено, що окислення 8-oxoG індукує вставку dAMP і dGMP навпроти ураження Kf exo- з тимчасовим інгібуванням подовження праймера o, що відбувається на місці модифікованої основи.Крім того, ураження є блоком під час синтезу ДНК за допомогою pol alpha та pol beta.Експерименти з 8-оксоА-модифікованим матричним олігонуклеотидом показують, що як 8-оксоА, так і окислена форма 8-оксоА безпосередньо вставляють dTMP за допомогою Kf exo-.Мас-спектрометричний аналіз олігонуклеотидів, що містять 8-oxoG, до та після окислення за допомогою IrCl62- узгоджується з окисленням головним чином сайту 8-oxoG, що призводить до утворення фрагмента гуанідиногідантоїну як основного продукту.Жодних доказів утворення абазичних сайтів отримано не було.Ці результати демонструють, що окислена форма 8-oxoG, можливо, гуанідиногідантоїн, може скеровувати неправильне читання та неправильне введення dNTP під час синтезу ДНК.Якби такий процес відбувався in vivo, він представляв би точкове мутагенне ураження, що призвело б до трансверсій G-->T і G-->C.Однак відповідна окислена форма 8-оксоА насамперед показує правильну вставку Т під час синтезу ДНК з Kf екзо-.